以下問(wèn)題是我們用戶(hù)在使用過(guò)程中遇到的問(wèn)題，我們咨詢(xún)了國外的技術(shù)人員，這是他們的答復
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)中給出的膠乳粒徑（Diameter）是平均粒徑。
一般選擇粒徑小的膠乳微球，則需要的抗體量就多，精密度和線(xiàn)性相對較好，而選擇粒徑大的膠乳微球性，則所需抗體少，精密度和線(xiàn)性相對較差，相對于小球，大球的靈敏度較好。
整個(gè)測定體系中，微球的濃度大約在0.01%左右，當然這與試劑本身規定的線(xiàn)性有關(guān)系。
需要多大的離心力和所使用的乳膠微球有關(guān)，一般70nm左右的微球大概13000g/min 30min以上，粒徑越小所需時(shí)間越長(cháng)，離心力越大。
羧基微球的活化所需時(shí)間很短，一般以10-20分鐘為宜，長(cháng)時(shí)間的活化反而會(huì )降低偶聯(lián)效率。
事實(shí)的確如此，當然由于抗體的空間折疊方式和FC端疏水性強，因此偶聯(lián)反應的絕大多數發(fā)生在Fc端，對抗體與抗原的結合的影響不大。
這種情況一般是偶聯(lián)效率低的原因。當體系中蛋白不足或是其它原因，使微球表面在交聯(lián)后還空出許多反應基團時(shí)，這些基團又可以與相連微球上的蛋白反應，結果是把球又拉在一起了，所以有聚集?？梢约右恍┳钄鄤?解決,常見(jiàn)的是BSA，另外，也可提高微球的交聯(lián)率。但為什么是過(guò)一段時(shí)間后才出現凝集呢，這是因為微球偶聯(lián)上蛋白后，相互之間由于攜帶同種電荷的關(guān)系，比較穩定（所以能以膠體樣存在），只有當偶爾相互碰撞，遇上彼此的反應基團時(shí)才能結合。
膠乳自凝與許多因素有關(guān)，如高電解質(zhì)濃度、表面價(jià)電荷被中和、或置于某些不利環(huán)境如冷凍時(shí)。如果電解質(zhì)濃度升高到某一水平，使得表面的價(jià)負荷被掩蔽，膠乳微球之間發(fā)生接觸，于是便產(chǎn)生凝集，故高離子強度的緩沖溶液不應使用，緩沖溶液的的濃度不要超過(guò)50mM，但有些CML膠乳微球具有高電荷密度，則也能夠耐受較高的離子強度。對負電荷膠乳微球，不能使用陽(yáng)電荷的緩沖溶液如Tris緩沖溶液，因為能使電荷中和而凝集。在長(cháng)期貯藏時(shí)，懸浮介質(zhì)的pH值應至少保持在比膠乳微球表面基團的pKa值高1-2pH單位。高濃度的膠乳微球容
這種情況大概是以下情況所致：一、乳膠微球含有表面活性劑，導致膠乳自身出現自凝現象，可以通過(guò)顯微鏡進(jìn)行觀(guān)察，如果是膠乳含有活性劑，則在偶聯(lián)之前進(jìn)行清洗，保證偶聯(lián)的膠乳微球沒(méi)有聚集。二、如果共價(jià)結合反應是成功的而抗體活性失活如此迅速，最常見(jiàn)的原因是抗體質(zhì)量差或試劑過(guò)期所致，而且還會(huì )出現一個(gè)自由流動(dòng)白色粉末、持續性團塊等，這表表明試劑已被污染。
一般常用的是低濃度的Goods緩沖液，如MOPSO、MES、HEPES等緩沖液，濃度在25-50mmol/L。
⑴抗原和抗體不匹配；
⑵包被的抗體量下足；
抗體使用量雖多，但偶聯(lián)效率低。
膠乳試劑隨著(zhù)檢測波長(cháng)的增加吸光度降低，為了保證試劑檢測過(guò)程中不超過(guò)吸光度的檢測限，一般膠乳試劑的波長(cháng)選擇在546-600nm左右。